بررسی بیان ژنaflR در قارچ آسپرژیلوس فلاووس توکسین زای جدا شده از پسته های شهر رفسنجان به روش مولکولی RT-PCR
محورهای موضوعی : میکروب شناسی
مژگان سقازاه
1
بیتا نجمی
2
(دانشجوی کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد قم، قم، ایران)
کلید واژه: آسپرژیلوس فلاووس, پسته, ژن aflR, RT-PCR,
چکیده مقاله :
مایکوتوکسین ها از متابولیت های ثانویه قارچ ها هستند که بوسیله تعدادی از قارچ ها بویژه آسپرژیلوس فلاووس و آسپرژیلوس پارازیتیکوس تولید می شوند و می توانند سرطانزا باشند. مواد غذایی در شرایط آب و هوای گرم بستری مناسب برای آلودگی به انواع کپک ها بخصوص گونه های آسپرژیلوس توکسین زا هستند و بدنبال آن باعث تولید آفلا توکسین در مراحل مختلف محصول ، هنگام برداشت و حمل و نگهداری آن می باشند. از آنجایی که ایران یکی از بزرگترین صادرکنندگان پسته درجهان است و یکی از آلودگی های مهم پسته آفلاتوکسین است. هدف از این پژوهش بررسی بیان ژن aflR در قارچ‌های آسپرژیلوس فلاووس توکسین‌زای جدا شده از پسته های شهر رفسنجان به روش مولکولی RT-PCR می‌باشد. این ژن نقش تنظیم کننده در بیان دیگر ژن‌های مسیر بیوسنتز آفلاتوکسین را دارد. در این پژوهش به طور تصادفی از 10 خشکبار فروشی در نقاط مختلف شهر، نمونه‌های پسته‌ی شهررفسنجان جمع آوری و یک مجموعه از1000 نمونه پسته جمع آوری شد، سپس قارچ های موجود با تکنیک‌های میکروبی جداسازی شدند. با بررسی‌های ماکروسکوپی و میکروسکوپی وجود قارچ آسپرژیلوس فلاووس، تایید شد. سپس محتویات ژنومی و RNA قارچ‌های توکسین‌زا استخراج ، تخلیص و آزمایش RT-PCR جهت بررسی بیان ژن مورد نظر انجام شد. در این تحقیق 42 سویه قارچ آسپرژیلوس فلاووس جدا شده از پسته‌های محصول شهر رفسنجان مورد بررسی قرار گرفت. درنهایت 9 نمونه از 42(4/21%) نمونه‌ی بررسی شده برای ژنaflR دارای بیان و به عبارت دیگر توکسین‌زا بودند.
Aflatoxins are carcinogenic secondary metabolites produced primarily by the fungal species Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus. Foods and feeds especially in warm climates, are susceptible to invasion by aflatoxigenic Aspergillus species and the subsequent production of aflatoxins during preharvesting, processing, transportation or storage. Since Iran is one of the largest producers of pistachios in the world, the aim of this study is investigation of the expression of aflR gene, one of the most essential genes for producing of Aflatoxin, by molecular method in toxigenic Aspergillus flavus isolated from Rafsanjan’s Pistachio, First time in Iran. Randomly, 1000 Pistachios, were collected from 10 dried fruits wholesales in Rafsanjan city. The species of A. flavus were identified morphologically. In the next step RNA of the A. flavus was extracted. RT-PCR technique was used for amplifying of aflR gene. Consequently, 41 Aspergillus flavus species were isolated from pistachioes. Overall, 9 samples (21.4%) were positive for aflR expression gene. Toxigenic fungus like Aspergillus flavus can grow on nuts which appropriately stored, such as pistachio, corn, peanuts, nuts, wheat and etc. So a molecular method is necessary for exact and rapid detection of these toxigenic fungi. The genes which participate in toxin maturity pathway, like aflR, can be used for valid probing and also were used for this study.
_||_